在緩沖液中Tris-HCl與HEPES都是應(yīng)用比較普遍的。為什么把它們兩個拿出來對比,這也是為了很好的讓大家了解到更多相關(guān)信息,以便在采購和使用過程中更準(zhǔn)確。
1、Tris-HCl緩沖液
Tris緩沖液是在生物化學(xué)研究中使用較廣泛的一種緩沖劑,其本身為弱堿,常用有效pH在“中性”范圍,Tris-HCl緩沖液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸鹽緩沖液:pH=5.0~9.0。
1)Tris-HCl緩沖液優(yōu)點(diǎn)
堿性較強(qiáng),可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的范圍pH緩沖液;對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
2)Tris-HCl緩沖液缺點(diǎn)
pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1
溫度效應(yīng)大,如4℃時pH=8.4,37℃時pH=7.4
2、HEPES緩沖液
HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。
1)HEPES緩沖液優(yōu)點(diǎn):
在開放式培養(yǎng)或Cells觀察時能維持較恒定的pH值,并對Cells傷害性作用。
2)HEPES緩沖液缺點(diǎn):
在高濃度時對一些Cells可能有毒,與其他緩沖劑相比價格略貴。
Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液的應(yīng)用
1、Tris-HCl緩沖液
Tris是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一,其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系,穩(wěn)定電泳過程中的PH。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物。Tris也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。作為蛋白緩沖液時,若后續(xù)工作需要質(zhì)譜,則不適宜用Tris,換成其他質(zhì)譜儀可耐受的緩沖液。
2、HEPES緩沖液
HEPES緩沖液對Cells傷害性作用,它是一種氫離子緩沖劑,能較長時間控制恒定的pH范圍。使用時濃度為10-50mmol/L,一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力。它還用于環(huán)境,分析和生物學(xué)研究;作為陽離子交換層析中的結(jié)合緩沖液和洗脫液;作為凝膠電泳中的運(yùn)行緩沖液等。