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集團(tuán)新聞

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Tris鹽酸緩沖液用于蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳

2023-09-04

Tris鹽酸即三羥甲基甲胺-鹽酸鹽Tris-HCl緩沖液,適用于大多數(shù)蛋白質(zhì)、核酸相關(guān)的研究實(shí)驗(yàn),通常用它作為緩沖液應(yīng)用在蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)中,電泳效果好分辨率高。

由Tris組成的生物緩沖液,常配成pH值為6.8,7.4,8.0,8.8。其pH值隨溫度變化相對(duì)較大。一般來說,溫度每升高一度,PH值下降0.03。1M Tris-HCl 6.8和1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常用的試劑。Tris可溶解核酸和蛋白質(zhì)。

Tris鹽酸緩沖液原料

SDS-PAGE是相當(dāng)普遍的聚丙烯酰胺凝膠電泳,是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳技術(shù),適合蛋白質(zhì)以及寡核苷酸的分離。聚丙烯酰胺凝膠呈微觀網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),具有分子篩效應(yīng),分為非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)兩種形式。

在蛋白質(zhì)SDS-PAGE不連續(xù)電泳實(shí)驗(yàn)中,制膠緩沖液使用的是Tris-HCL緩沖系統(tǒng),濃縮膠是pH值6.7,分離膠pH為8.9;而電泳緩沖液使用的Tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮電泳凝膠中,其pH值呈弱酸性,因此甘氨酸只有很少量的會(huì)解離,其在電場(chǎng)的作用下,泳動(dòng)效率低;而氯離子卻很高,兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶,蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。由于導(dǎo)電性與電場(chǎng)強(qiáng)度成反比,這一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度,壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一起,濃縮為一狹窄的區(qū)帶。

當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后,由于膠中pH的增加,呈堿性,甘氨酸大量解離,泳動(dòng)速率增加,直接緊隨氯離子之后,同時(shí)由于分離膠孔徑的縮小,在電場(chǎng)的作用下,蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進(jìn)行分離。

所以,pH對(duì)整個(gè)反應(yīng)體系的影響是至關(guān)重要的,實(shí)驗(yàn)中在排除其他因素之后仍不能很好解決問題的情況,應(yīng)首要考慮該因素,當(dāng)然其他的因素也可以從多方面考慮。

Tris鹽酸由Tris與鹽酸混合制得,像氨基丁三醇、緩血酸胺、2-氨基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇等都是指的Tris,還可以用于其它各種緩沖液體系。



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